FRET peptide ọna ẹrọ

Gbigbe agbara ipalọlọ Fluorescence (FRET)

Gbigbe agbara ti itanna fluorescence (FRET) jẹ ilana gbigbe agbara ti kii ṣe ipanilara ninu eyiti oluranlọwọ itara agbara ipinlẹ ti gbe lọ si ipo itara ti olugba nipasẹ ibaraenisepo ti awọn tọkọtaya ina mọnamọna intermolecular.Ilana yii ko kan awọn photon ati nitorina kii ṣe ipanilara.Iwadii yii ni awọn anfani ti iyara, ifarabalẹ ati irọrun.

Dye ti a lo ninu idanwo FRET le jẹ aami kanna.Ṣugbọn ninu ọpọlọpọ awọn ohun elo, awọn awọ oriṣiriṣi ni a lo ni otitọ.Ni ṣoki, gbigbe agbara resonance itanna jẹ gbigbe ti bata meji dipoles lati ọdọ oluranlọwọ (dye 1) si olugba (dye 2) nigbati ẹgbẹ oluranlọwọ ba ni itara.Ni gbogbogbo, itujade spekitiriumu ti Donor fluorophore ẹgbẹ ni lqkan pẹlu gbigba julọ.Oniranran ti awọn Acceptor ẹgbẹ."Nigbati aaye laarin awọn fluorophores meji ba yẹ (10 - 100 A), gbigbe agbara fluorophore lati ọdọ oluranlowo si olugba le ṣe akiyesi."Ọna gbigbe agbara da lori ilana kemikali ti olugba:

1. Ti yipada si gbigbọn molikula, iyẹn ni, ina ina ti gbigbe agbara npadanu.(Olugbagba jẹ olupa ina)

2. Ijadejade jẹ lile diẹ sii ju olugba funrararẹ, ti o yọrisi iyipada pupa kan ni irisi fluorescence keji.”(Awọn olugba jẹ awọn emitters luminous).

Ẹgbẹ oluranlọwọ (EDANS) ati jiini itẹwọgba (DABCYL) jẹ iṣọkan ni iṣọkan si sobusitireti adayeba ti protease HIV, ati nigbati sobusitireti ko ba ge asopọ, DABCYL le pa EDANS kuro lẹhinna di aimọ si fluorine.Lẹhin gige asopọ protease HIV-1, EDANS ko ni parun nipasẹ DABCYL, ati pe EDANS luciferases le ṣe akiyesi nigbamii.Wiwa ti awọn inhibitors protease le ṣe abojuto nipasẹ awọn ayipada ninu kikankikan fluorescence ti EDNS.

Awọn peptides FRET jẹ awọn irinṣẹ irọrun lati ṣe iwadi aibikita peptidase.Niwọn igba ti ilana ifaseyin rẹ le ṣe abojuto nigbagbogbo, o pese ọna irọrun fun wiwa iṣẹ ṣiṣe henensiamu.Sheen ti a ṣe lẹhin hydrolysis ti awọn iwe ifowopamosi peptide nipasẹ oluranlọwọ/olugba n pese iwọn iṣẹ ṣiṣe enzymu ni awọn ifọkansi nanomolar.Nigbati peptide FRET ba wa ni mule, o fihan ipadanu lojiji ti filasi inu, ṣugbọn nigbati eyikeyi asopọ peptide ti o lodi si oluranlọwọ / olugba ba fọ, o tu filasi kan, eyiti o le rii nigbagbogbo ati pe iṣẹ-ṣiṣe henensiamu le lẹhinna jẹ iwọn.